Alba-STED FLIM/FFS, sistema di imaging fluorescente a scansione laser-Fornitore globale

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Alba-STED FLIM/FFS, sistema di imaging fluorescente a scansione laser

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Vista sopra

Lo strumento per la biologia cellulare quantitativa alla rilevazione singola molecola.

Stimulated Emission Depletion (STED) è una potente tecnica di microscopia che consente di osservare la struttura della fluorescenza con risoluzione spaziale al di sotto del limite di diffrazione. L'Alba-STED utilizza l'approccio di eccitazione pulsata e esaurimento pulsato (pSTED) in combinazione con l'imaging di vita a fluorescenza a dominio di frequenza digitale (FastFLIM) per registrare i fotoni risolti nel tempo che consente un aumento della risoluzione dell'immagine e la separazione di due etichette con la stessa lunghezza d'onda di eccitazione.

Caratteristiche principali di Alba-STED per FLIM/FFS:

pSTED (eccitazione pulsata e STED pulsato)
FastFLIM per l'acquisizione pSTED risolta nel tempo
Migliorata risoluzione dell'immagine utilizzando il fasor plot

Eccitazione a doppia etichetta
Acquisizione rapida dell'immagine (tempo di permanenza: 0,2 µs)
Alta gamma dinamica (segnale fino a 60 milioni di conteggi/s)

Misure con Alba-STED per FLIM/FFS:

Immagini confocali 1p o 2p
Immagine a vita a fluorescenza FLIM (FastFLIM)
PLIM, Immagine a vita di fosforescenza
Immagini di polarizzazione
Fluttuazioni di fluorescenza Spettroscopia (FCS, FCCS, PCS, FLCS)
RICS, N&B, Scansione FCS
Analisi Burst
Determinazione dell'efficienza FRET

Specifiche per Alba-STED per FLIM/FFS

Caratteristiche dello strumento	Fori individuali su ogni canale di acquisizione Selezione controllata dal computer dell'apertura variabile del foro Posizionamento controllato dal computer del foro nel piano di imaging Eccitazione monofotonica o multifotonica Acquisizione dati fino a quattro canali Porta ausiliaria per fotocamera
Software di acquisizione e analisi	VistaVision di ISS
Laser STED	Impulso, 775 nmPotenza media di uscita: 1 W Larghezza pulso: circa 600 ps Velocità di ripetizione: 0-100 MHz; o Ext. CLK Qualità del fascio: M²< 1,1, TEM00 Rumore di amplitudine: < 4,0% rms
Laser di eccitazione	Impulso, 640 nmLarghezza pulso (a media potenza): 40-90 ps Velocità di ripetizione: 20, 50, 80 MHz; o Ext. CLK Potenza (a 50 MHz): fino a 5 mW
Lanciatore laser	Modelli per 3, 4, 6 laser. La luce viene consegnata al microscopio attraverso una fibra ottica monomodale.
FastFLIM	4 segnali di ingresso separati Gamma dinamica: fino a 15 milioni di conteggi/s per canale Durata della vita: da picosecondo a secondo
Microscopio	Invertito o verticale
Obiettivi	Obiettivi aria con ingrandimento 20X, 40X, 60X e distanze di lavoro 1,5-8,1 Obiettivi di immersione in olio, 1.4 NA e 60X (standard); altre aperture disponibili Obiettivi di immersione in acqua, 1.2 NA 60X (standard), con correzione del coprislittamento (per coprislittamento 0.15-0.18); altre aperture disponibili
Fasi	Movimento a grande distanza (100x100x10 mm) Fase XYZ a motore passo Movimenti a microdistanza XYZ stadio piezo-controllato, 100x100x50 µm con risoluzione passo 5 nm.
Titolari del campione	Piastre per micropozzetti Piatti di Petri Copertura
Rilevatori di luce	GaAs PMT (modelli Hamamatsu H7422P) PMT ibridi (modelli Hamamatsu R10467U) SPAD
Acquisizione di immagini	Acquisizione FLIM: tempo di permanenza 0,2 µs
Requisiti del sistema operativo	Windows 10, 64 bit
Requisiti energetici	Ingresso universale: 110-240 V, 50/60 Hz, 400 VAC
Dimensioni	885 mm (L) x 600 mm (L) x 330 mm (H)
Peso	40 kg

Misure per Alba-STED per FLIM/FFS

Misure FFS	Spettroscopia di correlazione fluorescente (singola e cross-correlation) Istogramma di conteggio dei fotoni (PCH) Misurazioni FFS nelle posizioni XYZ target in un'immagine FLCS, fluorescenza spettroscopia di correlazione a vita Scansione FCS Numero e luminosità (N&B) Spettroscopia di correlazione delle immagini raster (RICS)
Misurazioni a modulo singolo	Intensità Polarizzazione Kinetica Durata della vita
Misurazioni del modulo di imaging (piano singolo e z-stack)	Intensità Polarizzazione Ratiometrica FLIM
Immagini FLIM (dominio di frequenza digitale) (singolo piano e z-stack)	Acquistato nel dominio di frequenza digitale (DFD). La routine acquisisce contemporaneamente un'immagine FLIM e un'immagine a stato costante.
Immagini FLIM a dominio temporale (singolo piano e z-stack)	Acquistato nel conteggio di fotoni singoli correlati al tempo (TCSPC)
Superrisoluzione	STED
Modulo singola molecola	Analisi Burst FRET e metodi di correlazione Metodi PIE-FRET

Schema di Alba-STED per FLIM/FFS

Esempi di misurazione da Alba-STED per FLIM/FFS

Immagini confocali (sinistra) vs. pSTED (destra) dell'attina etichettata con il colorante SiR in cellule gliali fisse, acquisite da FastFLIM.

Immagini confocali di perline di fluorescenza a 60 nm (sinistra); immagini pSTED (mezzo); affilare l'immagine pSTED utilizzando un filtro binario basato sui grafici phasor (destra).

Le doppie etichette possono essere separate utilizzando pSTED e FastFLIM. Atto 647N e Atto 655 sono stati utilizzati come etichette; Entrambi sono eccitati dal laser a 640 nm. I due coloranti vengono prima separati utilizzando i fasori, e poi assegnati con due diversi falsi colori (Atto 647N - giallo, Atto 655 - viola) per produrre l'immagine pSTED elaborata e fusa delle due etichette.

Opzioni e accessori disponibili per Alba-STED per FLIM/FFS

Porta di rilevamento non scansionato (NDD)

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La rilevazione attraverso la porta di rilevamento non scansionata (NDD) viene utilizzata in combinazione con l'eccitazione multifotonica; i fotoni di fluorescenza generati nel punto di eccitazione del laser vengono sparsi indietro e raccolti subito dopo l'obiettivo (senza passare attraverso l'ottica nel percorso di scansione).

La Figura mostra la porta NDD del microscopio Nikon Model Ti accoppiato all'Alba. Un raiser viene introdotto sul microscopio Nikon sopra la porta di epifluorescenza per collegare la porta NDD e aggiungere la cartuccia filtri dove vengono inseriti i filtri dicroici per il rilevamento NDD. I rilevatori sono montati su un supporto ortogonale completo di supporti dicroici e filtri. La porta NDD utilizza PMT GaAs o rilevatori ibridi. L'uscita dei rilevatori viene deviata sia all'unità di acquisizione dei dati.

Modulo di rilevamento trasmesso di scansione lasercon un PMT di conteggio dei fotoni

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Il T-PMT è un modulo di rilevamento trasmesso con un PMT di conteggio dei fotoni che funziona con microscopi invertiti.

Il modulo è installato accanto alla lampada di illuminazione a trasmissione del microscopio e dispone di un cursore manuale per scegliere tra il PMT e l'illuminazione della lampada.

Fasi del microscopio

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Fase a motore passo passo XYZ per piastre Microwell (piastre a 8, 96 e 384 pozzi)

Lo stadio XYZ fornisce controlli ad alta risoluzione, altamente ripetibili e veloci per la posizione X, Y e Z dello stadio del microscopio; utilizza scorrevoli a rulli incrociati, una vite a piombo ad alta precisione e servomotori a corrente continua in miniatura a ingranaggio zero per un movimento liscio e preciso. Controllato tramite la porta USB, è la fase ideale per misurare campioni in una piastra microwell.

VistaVision include protocolli per la misurazione automatica in singoli punti (FFS, durata di vita, polarizzazione); l'utente può selezionare le misurazioni sequenziali su tutti i pozzi; In alternativa, è possibile selezionare un insieme di pozzi per le misurazioni.

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